产品货号：
BTN14-32300
中文名称：
乳酸杆菌属荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Lactococcus spp. qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本公司开发乳酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒。
乳酸杆菌是可使葡萄糖等糖类分解为乳酸的各种细菌的总称。
乳酸菌是一种无芽孢的杆菌，属革兰氏阳性菌，厌氧性呼吸。广泛分布于自然界，有些菌株是人和动物口腔、肠道及阴道的正常菌群之一，很少致病，除极偶尔引起亚急性细菌性心内膜炎外，对人基本无害。寄生于口腔的乳酸杆菌在龋齿发生中起重要作用。一般认为寄生于肠道和阴道的乳酸杆菌对机体有保护作用某些乳杆菌如嗜酸性乳杆菌、保加利亚乳杆菌，常用于饮料的发酵工业。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：乳酸杆菌属荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Lactococcus spp. qPCR Kit(SYBR)
乳酸杆菌是可使葡萄糖等糖类分解为乳酸的各种细菌的总称。
乳酸菌是一种无芽孢的杆菌，属革兰氏阳性菌，厌氧性呼吸。广泛分布于自然界，有些菌株是人和动物口腔、肠道及阴道的正常菌群之一，很少致病，除极偶尔引起亚急性细菌性心内膜炎外，对人基本无害。寄生于口腔的乳酸杆菌在龋齿发生中起重要作用。一般认为寄生于肠道和阴道的乳酸杆菌对机体有保护作用某些乳杆菌如嗜酸性乳杆菌、保加利亚乳杆菌，常用于饮料的发酵工业。
- 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
- 引物根据乳酸杆菌属专一区设计，特异性高。
- 荧光定量PCR检测，比常规PCR更加灵敏。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本制品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 乳酸杆菌属通用染料法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 乳酸杆菌属通用染料法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL PCR阳性对照的10000倍稀释的(稀释后浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝，可以将10μL原液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为10000倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品DNA。
- 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次核酸释放剂试用装，其使用手册可以在本公司网站www.bjbalb.com上输入产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液，浓度为14810拷贝/μL)。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个，其余不变。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX，则用水替代。成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管PCR阳性对照管
(2～7管)2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 乳酸杆菌属通用染料法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL N+2待测样品cDNA模板 6μL - - 自备超纯水 - 6μL - 第7步所得PCR阳性对照稀释液(2～7号) - - 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min，(采集SYBR通道的荧光信号) 按仪器预设程序进行熔解曲线分析
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品cDNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于37。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于37则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～37之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于37则为阴性，如果小于35，则为阳性。
相关搜索：乳酸杆菌属荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Lactococcus spp. qPCR Kit(SYBR)